[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: ثبت نام :: تماس با ما ::
:: دوره 5، شماره 4 - ( زمستان 1394 ) ::
جلد 5 شماره 4 صفحات 542-550 برگشت به فهرست نسخه ها
تشخیص کلبسیلا پنومونیه از طریق توالی اختصاصی 16SrDNA با استفاده از تکنیک PCR-ELISA
فاطمه طیبه1، جعفر امانی 2، مهدی مرادیار3، سید علی میر حسینی1
1- مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران.
2- مرکز تحقیقات میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج)، تهران، ایران. ، jafar.amani@gmail.com
3- گروه زیست شناسی، دانشگاه آزاد دامغان، دامغان، ایران.
چکیده:   (4577 مشاهده)

زمینه و هدف: کلبسیلا پنومونیه از اعضای خانواده‌ی انتروباکتریاسه یکی از مهم ترین عامل‌های عفونت‌های بیمارستانی می‌باشد که بعد از Escherichia coli دومین عامل باکتریمی بیمارستانی ناشی از باکتری‌های گرم منفی است. در این تحقیق هدف شناسایی این باکتری از طریق ژن اختصاصی 16SrDNA با به کارگیری تکنیک PCR-ELISA می باشد.

مواد و روش‌ها: در این روش با استفاده از dNTP نشان‌دار شده با دیگوکسی ژنین برای تکثیر ژن اختصاصی استفاده شد. کف پلیت الایزا استرپتوآویدین بارگذاری کرده سپس با استفاده از پروب اختصاصی که قسمت ابتدای آن بیوتینه شده بود جهت اتصال به ژن تکثیر شده استفاده گردید. بیوتین متصل به پروب به استرپتوآویدین متصل شده، همچنین ژن تکثیر یافته نیز به پروب اختصاصی متصل  شده در نهایت از آنتی بادی ضد دیگوکسی ژنین برای شناسایی محصول استفاده شد و واکنش با دستگاه نور سنج اندازه گیری شد.

نتایج: با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن 16SrDNA کلبسیلا پنومونیه تکثیر شد که نتیجه آن یک قطعه به طول bp 260 بود. نتایج حاصل از PCR-ELISA نشان داد که این تکنیک هیچ واکنش متقاطعی با با کتری‌های هم خانواده خود ندارد، همچنین میزان حساسیت آن 6/0 نانوگرم ارزیابی شد.

نتیجه‌گیری: تکنیک PCR-ELISA روشی حساس و دقیق بوده که برای شناسایی عوامل بیماری‌زا با استفاده از ژن اختصاصی آن باکتری به کار می‌رود. این تکنیک می‌تواند جایگزین مناسبی برای تکنیک‌های زمان بر، با حساسیت کمتر و هزینه بیشتر، همچون روش‌های کشت باکتری در محیط‌های بلاد آگار و مک کانکی آگار، Realtime PCR ، تست‌های بیوشیمیایی افتراقی که امروزه در آزمایشگاه‌ها مورد استفاده قرار می‌گیرد، باشد.

واژه‌های کلیدی: انتروباکتریاسه، کلبسیلا پنومونیه، 16SrDNA، PCR-ELISA
متن کامل [PDF 888 kb]   (1249 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: ميكروبیولوژی
دریافت: ۱۳۹۴/۵/۱۵ | پذیرش: ۱۳۹۴/۱۰/۱۴ | انتشار: ۱۳۹۴/۱۲/۱۷
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

کد امنیتی را در کادر بنویسید >



XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Tayebeh F, Amani J, Moradyar M, Mirhossaini S A. The detection of Klebsiella pneumoniae 16srRNA specific gene by PCR-ELISA technique. J Fasa Univ Med Sci. 2016; 5 (4) :542-550
URL: http://journal.fums.ac.ir/article-1-714-fa.html
طیبه فاطمه، امانی جعفر، مرادیار مهدی، میر حسینی سید علی. تشخیص کلبسیلا پنومونیه از طریق توالی اختصاصی 16SrDNA با استفاده از تکنیک PCR-ELISA. مجله دانشگاه علوم پزشکی فسا. 1394; 5 (4) :542-550

URL: http://journal.fums.ac.ir/article-1-714-fa.html

دوره 5، شماره 4 - ( زمستان 1394 ) برگشت به فهرست نسخه ها
Journal of Fasa University of Medical Sciences
Persian site map - English site map - Created in 0.05 seconds with 796 queries by yektaweb 3503