:: دوره 6، شماره 3 - ( پاییز 1395 ) ::
جلد 6 شماره 3 صفحات 311-318 برگشت به فهرست نسخه ها
کلون کردن اپی توپ های خطی تحریک کننده ی لنفوسیت T آنتی ژن EG95 اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pGEX4t1 و بررسی بیان آن با روش SDS-PAGE
رقیه مصری1، مجید اسمعیلی زاد2، مژگان احمدزاده1، سمیه محمدی1، سید عبدالحمید انگجی1، زهرا یزدان پور3، سیده فهیمه میر حقگوی جلالی3
1- گروه آموزشی سلولی و مولکولی، دانشکده علوم زیستی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران
2- بخش آزمایشگاه مرکزی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم‌سازی رازی، کرج، ایران ، m.esmaelizad@rvs
3- بخش آزمایشگاه مرکزی، مؤسسه تحقیقاتی واکسن و سرم‌سازی رازی، کرج، ایران
چکیده:   (7412 مشاهده)

زمینه و هدف: انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس عامل بیماری مشترک بین انسان و دام به نام کیست هیداتیک یا هیداتیدوزیس است؛ موفق­ترین واکسن نوترکیب علیه این بیماری از کلون کردن ژن کد کننده آنتی­ژن 25 کیلو دالتونی آن یعنی EG95 در وکتور pGEX می­باشد که ایمنی سلولی و همورال قابل‌توجهی را در گوسفندان ایجاد کرده است اما با توجه به نقش ایمنی سلولی TH1 در غلبه بر این بیماری و نقش اپی­توپ­های خطی در تحریک این نوع سیستم ایمنی جهت بهینه‌سازی شرایط واکسن موجود در مطالعه حاضر تنها توالی کد کننده اپی­توپ­های خطی تحریک‌کننده لنفوسیت T این آنتی­ژن کلون و بیان شد.

مواد و روش­ها: با استفاده از نرم‌افزار IEDB توالی کد کننده‌ی اپی­توپ­های خطی آنتی­ژن EG95 پیش­بینی و سنتز شد. تکثیر قطعه موردنظر با PCR انجام و بعد از هضم آنزیمی آن و وکتور pGEX4T1 با آنزیم xhoI، در وکتور با روش شوک حرارتی کلون گردید. کلونی­های مثبت با روش colony PCR با استفاده از پرایمرهای مختلف انتخاب‌شده و بیان پروتئین نوترکیب در سلول BL21 با 10%SDS-PAGE موردبررسی قرار گرفت.

نتایج: تکثیر توالی کد کننده اپی­توپ­های EG95 با PCR انجام و قطعه موردنظر در وکتور pGEX4T1 کلون گردید. تأیید پلاسمید نوترکیب با colony PCR و اختلاف اندازه وکتور طبیعی و نوترکیب صورت گرفت. بیان پروتئین نوترکیب آنتی­ژن نیز به‌وضوح با SDS-PAGE مشخص شد.

نتیجه­ گیری: قطعه EG95 به‌طور موفقیت­آمیزی در وکتور pGEX4T1 کلون و در سلول BL21 بیان شد.

واژه‌های کلیدی: واکسن های اپی توپی، لنفوسیت T، آنتی ژن EG95، کیست هیداتیک
متن کامل [PDF 1562 kb]   (1517 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: ايمونولوژي
دریافت: 1394/11/20 | پذیرش: 1395/3/25 | انتشار: 1395/9/29


XML   English Abstract   Print



دوره 6، شماره 3 - ( پاییز 1395 ) برگشت به فهرست نسخه ها