[صفحه اصلی ]   [Archive] [ English ]  
:: صفحه اصلي :: درباره نشريه :: آخرين شماره :: تمام شماره‌ها :: ثبت نام :: تماس با ما ::
:: دوره 3، شماره 1 - ( بهار 1392 ) ::
جلد 3 شماره 1 صفحات 18-26 برگشت به فهرست نسخه ها
طراحی و ساخت کاست ژنی ctxB-gfp-stxBو بررسی بیان‌ آن در E. coli سویه (Bl21 (DE3
عقیل اسماعیلی 1، حسین هنری، صادق صفایی، مهدی غفرانی
1- ، Aghilesmaeili62@gmail.com
چکیده:   (22798 مشاهده)

زمینه و هدف : پروتئین­های نوترکیب کایمریک ، به منظور افزایش بیان پروتئین ­ های محلول، تسهیل در تخلیص آن­ها و تولید پلی­پپتید چند­منظوره، ابداع شده­اند. هدف از این تحقیق، ساخت کاست ژنی ctxB -gfp-stxB و بررسی بیان آن به منظور بررسی میزان جذب و دفع آنتی­ژن الحاقی در مطالعات بعدی می‌باشد.

 

مواد و روش‌ها : پس از تهیه پرایمر­های مورد نیاز برای ژن­های gfp به عنوان ژن گزارشگر، ctxB و stxB ، از تکنیک PCR برای تکثیر ژن­ها استفاده شد. ژن­های تکثیر شده، در وکتور pGEM ، همسانه­سازی و پس از تایید قطعات ژنی به ترتیب ctxB –gfp-stxB به یکدیگر ممزوج شدند. سپس، کاست ژنی ساخته شده، در وکتور بیانی pET28a(+) هم سانه ­ سازی شد. باکتری E . coli سویه ( DE3 (Bl21 ، توسط وکتور نوترکیب، ترانسفورم شد و بیان پروتئین، تحت القای IPTG و الکتروفورز SDS-PAGE ارزیابی شد.

 

نتایج : ژن‌های تکثیر شده در وکتور pGEM ، همسانه­سازی شدند و کلون­ها به کمک سه روش PCR ، هضم آنزیمی و توالی یابی، تایید شدند. قطعات ژنی تایید شده به ترتیب ctxB -gfp-stxB به یکدیگر ممزوج شد. پس از زیرهمسانه­سازی، وجود کاست ژنی ساخته شده به روش هضم آنزیمی تایید شد. برای این کاست ژنی، در E . Coli سویه Bl21(DE3) ، بیانی مشاهده نشد.

 

نتیجه‌گیری : تعداد زیاد کدون‌های نادر در ژن‌های stxB و ctxB ، باعث عدم بیان کاست ژنی در E .coli شد. بنابراین، برای دستیابی به بیان و بهینه ­ سازی آن، یافتن میزبانی مناسب، ضروری است. با توجه به ساختار کاست ژنی و جایگاه آنزیم‌های محدودالاثر بر روی قطعه ساخته شده، ژن ‌ های مختلف را می ‌ ‌توان جایگزین نموده و قطعات متنوع ژنی تولید نمود.

واژه‌های کلیدی: پروتئین‌های نوترکیب کایمریک، همسانه‌سازی، بیان، کدون‌های نادر
متن کامل [PDF 1772 kb]   (2898 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: بیوتکنولوژی پزشکی
دریافت: ۱۳۹۱/۹/۱ | پذیرش: ۱۳۹۱/۱۱/۲۸ | انتشار: ۱۳۹۲/۶/۲۳
ارسال پیام به نویسنده مسئول

ارسال نظر درباره این مقاله
نام کاربری یا پست الکترونیک شما:

CAPTCHA code


XML   English Abstract   Print


Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:

Esmaeili A, Honari H, Safaei S, Ghofrani M. Design and Construction of ctxB-gfp-stxB Gene Cassette and Investigation of Its Expression in E. coli Bl21 (DE3). J Fasa Univ Med Sci. 2013; 3 (1) :18-26
URL: http://journal.fums.ac.ir/article-1-221-fa.html

اسماعیلی عقیل، هنری حسین، صفایی صادق، غفرانی مهدی. طراحی و ساخت کاست ژنی ctxB-gfp-stxBو بررسی بیان‌ آن در E. coli سویه (Bl21 (DE3. مجله دانشگاه علوم پزشکی فسا. 1392; 3 (1) :18-26

URL: http://journal.fums.ac.ir/article-1-221-fa.html



دوره 3، شماره 1 - ( بهار 1392 ) برگشت به فهرست نسخه ها
Journal of Fasa University of Medical Sciences
Persian site map - English site map - Created in 0.06 seconds with 31 queries by YEKTAWEB 3754