:: دوره 2، شماره 3 - ( پاییز 1391 ) ::
جلد 2 شماره 3 صفحات 135-141 برگشت به فهرست نسخه ها
الحاق ژنی زیرواحد B سم کلرا (ctB) با زیرواحد B انتروتوکسین شیگلا دیسانتری تیپ 1 (stxB) ، همسانه سازی و بیان آن در باکتری E .coli
حمید معدنچی1، حسین هنری، صادق صفایی، علی صیادمنش
1- ، hamidmadanchi@yahoo.com
چکیده:   (17005 مشاهده)
زمینه و هدف: یکی از مهم‌ترین فاکتورهای بیماری‌زای اصلی در شیگلا دیسانتری تیپ 1، انتروتوکسین شیگلا یا STxمی‌باشد، که از یک زیر واحد سمی آنزیماتیک به نام STxA و یک زیر واحد پنتامریک متصل شونده به رسپتور به نام زیر واحد B یا STxB تشکیل شده است. زیر واحد STxB مسئول اتصال زیر واحد سمی به گیرنده سطح سلولی Gb3 بوده و در نهایت باعث ورود سم به درون سلول و اثرات آن می‌شود. زیر واحد B سم کلرا (CTB) به عنوان ادجوانت مخاطی قوی برای واکسیناسیون شناخته شده و همجوشی ژنتیکی آن با هترو آنتی ژن هایی مثل stxB باعث تقویت ایمنی همورال و مخاطی و پاسخ ایمنی علیه آن آنتی ژن می‌گردد.
مواد و روش‌ها: در این مطالعه ژن‌های ctB و stxB پس از طراحی پرایمر به وسیله PCR تکثیر و در وکتور pGEMهمسانه‌‌سازی شدند. ژن stxB به همراه لینکر غیرفورینی به روش برش آنزیمی با ژن ctB در وکتور pGEM الحاق شدند و در نهایت قطعه کایمریکctB-stxB در وکتور بیانی pET28a(+) زیر همسانه‌سازی گردید. پروتئین کایمر تحت القای IPTG بهینه‌سازی و به وسیله تکنیک SDS-PAGE و وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت.
نتایج: قطعه کایمریک ctB-stxBدر وکتور بیانی pET28a(+) به وسیله توالی یابی، PCR و آنالیز آنزیمی تأیید گردید. همچنین پروتئین تولیدی به وسیله SDS-PAGE و وسترن بلات مورد تأیید قرار گرفت.
نتیجه گیری:
پروتئین نوترکیب تولیدی بعد از بررسی ایمنی زایی می تواند به عنوان کاندیدی برای واکسن مخاطی موثر و نوین علیه باکتری شیگلا دیسانتری تیپ 1 در نظر گرفته شود.
واژه‌های کلیدی: شیگلا دیسانتری تیپ 1، STxB، CTB، ادجوانت، لینکر غیر فورینی.
متن کامل [PDF 1631 kb]   (3068 دریافت)    
نوع مطالعه: پژوهشي | موضوع مقاله: ميكروبیولوژی
دریافت: ۱۳۹۱/۱۱/۱۲ | پذیرش: ۱۳۹۲/۶/۲۳ | انتشار: ۱۳۹۲/۶/۲۳


XML   English Abstract   Print



دوره 2، شماره 3 - ( پاییز 1391 ) برگشت به فهرست نسخه ها